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2024年12月，南京医科大学李晶等团队在Journal of Extracellular Vesicles（IF=15.5）上发表了“Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography”的研究论文。该论文提供了一种切向流过滤（TFF）结合尺寸排阻色谱（SEC）的方法来大规模分离和纯化源自人脐带间充质干细胞（HucMSCs）的sEVs亚群。S1-sEVs和S2-sEVs在大小、膜标记蛋白和携带物方面表现出稳定的变化，通过体外实验和动物疾病模型，研究人员验证了S1-sEVs和S2-sEVs的不同功能。S1-sEVs表现出更强的免疫调节作用，而S2-sEVs则在促进细胞增殖和血管生成方面表现出更强的能力。这种方法为针对不同MSCs适应症的靶向治疗干预提供了可能。拜谱海洋生物为该研究提供了淀粉酶组学拜谱生物。
英语怎么说子标题：Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography
撤稿杂志期刊：Journal of Extracellular Vesicles
干扰指数公式：15.5
先生发表用时：2024.12.7
我们企业单位：南京医科大学
组学工艺：miRNA测序、核蛋白组学（拜谱微生物展示）
科研资料：外泌体
探索路线规划：
一、探析可是
01、进行将TFF与SEC控制系统相组合来分离法sEVs亚群和HucMSCs
为了能让达到适当临床医学应用软件的MSC-sEVs的大企业规模制作，原著者所采用好几个种将TFF与SEC相构建的手段，从HucMSCs的前提条件塑造基中分刘海离和纯化sEVs。在核核苷酸痕迹、NTA浅析、纳流癌细胞术的然而是因为破乳的多个峰可能会意味了sEVs的多个差异亚群。原著者将表示于这多个最高值的sEVs亚群分开 排列顺序为S1-sEVs和S2-sEVs（图1）。
图1：TFF配合SEC系統从HucMSCs中分发型离和研究方法sEVs亚群
02、MSC-sEVs亚群的分析方法
sEVs标志物的差异表达意味着它们可能具有不同的内容或功能。为了表征MSC-sEVs亚群的异质性，首先使用蛋清组学分析。总共在S1和S2-sEVs亚群中分别鉴定出1326和1246个蛋白质，其中447个蛋白质在S1-sEVs中高度表达，127个蛋白质在S2-sEVs中富集（图2a）。KEGG分析表明，蛋白酶体途径是S1-sEVs富集蛋白中最富集的通路，而代谢途径在S2-sEVs中显示出最高水平的富集（图2b）。除此之外，还发现S1-sEVs中生长因子受体的富集，例如表皮生长因子受体（EGFR）、肝细胞生长因子受体（HGFR）、成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）等。然而，在S2-sEVs中，枢纽蛋白与代谢、糖酵解和缺氧诱导因子1（HIF-1）信号通路密切相关（图2c-h）。这说明了S1-sEVs和S2-sEVs在靶细胞活动的调节中可能具有不同的作用。
图2：两只sEVs亚群的蛋白酶质组学分享
为了探索sEVs亚群中的其他分子，作者进行了miRNA测序，并在S1-sEVs和S2-sEVs中分别鉴定了173和79个miRNA两个sEVs亚群之间的差异表达miRNA，其中在S1-sEVs中发现了113个独特的miRNA，而在S2-sEVs中仅发现了19个miRNA（图3a-b）。通过qRT-PCR验证了在S1-sEVs或S2-sEVs中富集的代表性miRNA，包括let-7b-5p、miR-155-5p、let-7c-5p、miR-9-5p和miR-30d-5p（图3c-g）。在S1-sEVs中，核心节点靶基因包括酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白zeta（YWHAZ）、BTB结构域和CNC同源物1（BACH1）、丛蛋白D1（PLXND1）、高迁移率组AT-hook1（HMGA1）、SMAD家族成员2（SMAD2）、IL6、IL6R 和转化生长因子β受体1（TGFBR1).在S2-sEVs中，核心节点靶基因被鉴定为PR/SET结构域1（PRDM1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（CDKN1A）、原纤维蛋白2（FBN2）、Notch受体1（NOTCH1）、KLF转录因子6（KLF6）和贝克蛋白1（BECN1）。GO分析显示S1-sEVs组靶基因中与细胞内蛋白质转运、染色质或组蛋白修饰相关的丰富生物过程，而S2-sEVs组靶基因中富含细胞增殖或代谢相关生物过程的负调控（图3h-j）。KEGG通路分析，发现S1-sEVs的miRNAs靶基因在与RNA转运或贴壁连接等相关的信号通路中更富集，而S2-sEVs中的miRNAs靶基因在丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和Wingless/Integrated（WNT）信号通路中更富集（图3k）。
图3：2个sEVs亚群的miRNA谱
03、S1-sEVs和S2-sEVs对癌细胞系增值能力和巨噬癌细胞系极化的相互影响调节作用
立于两个人sEVs亚群的各个挟带物分为，科研进1步分用这三种各个摄入量的S1-sEVs或S2-sEVs提升3T3神经元核各种用脂多糖（LPS）进行处理小鼠骨髓种类的巨噬神经元核（BMDMs）。数据察觉S1-sEVs和S2-sEVs对神经元核衍生和分裂主义波特率主要表现出各个的影向，但是对巨噬神经元核极化的工作能力存在的一定的差异（图4a-p）。
图4：S1-sEVs和S2-sEVs对神经元分裂繁殖和巨噬神经元极化的不同干预
04、S1-sEVs和S2-sEVs前边肢坏死中的相互影响调准
MSC简答衍生物的sEVs实现推进新微微微血管的构成之后肢脑供血不足诊疗中被大面积了解，考虑到观测S1-sEVs和S2-sEVs对微微微血管产生和脑供血不足组建复苏的关系，实现单边股主动脉结扎搭建了小鼠后肢脑供血不足模式化。可是意味着与S1-sEVs相对，S2-sEVs表达出桌越的促微微微血管产生的特点，引发脑供血不足诱导性受伤后后肢最快仍然修复手机和复苏（图5a-o）。
图5：S1-sEVs和S2-sEVs对后肢脑供血不足的多种中药治疗视觉效果
05、S1-sEVs和S2-sEVs在造成 伤口处痊愈中的使用
MSC基本衍生品的sEV主要是因为在微创手术、手术创伤面积比较小、烧伤或血糖值高的症状使得的脸部皮肤吧组织伤口发炎处结痂痊愈中的作用而被普遍实验。要想关察脱离的sEVs亚群对脸部皮肤吧组织伤口发炎处结痂痊愈的作用，本实验确立打了个个有着深部2度烧伤的大鼠类别。没想到揭示S2-sEVs借助对糖酵解的积极参与作用对脸部皮肤吧组织伤口发炎处结痂痊愈情况出极其很有益的作用（图6a-p）。
图6：S1-sEVs和S2-sEVs对皮肤图片伤口处长好的不一样的后果
06、S1-sEVs和S2-sEVs对DSS诱惑的乙状结肠炎的有差异 控制功效
小说家挖掘S1-sEVs和S2-sEVs对巨噬细胞系正负极的距离调整在这之后，坚持在小鼠直肠炎建模方法中考核患者的免疫抗体调整功能性。后果表明了S1-sEVs改善DSS诱发的直肠炎的特男人（图7a-s）。
图7：S1-sEVs和S2-sEVs对面部皮肤伤疤长好的其他干扰
07、sEVs的两个亚群中动物突发的差异性干预
ESCRT信任症性路径和非ESCRT性路径都指导性sEV的海洋微生物再次遭受。在某项科研中，小说家察觉了sEVs标志的意思物在S1-sEVs和S2-sEVs中的差异性表达方法。EGFR是有趣内吞路径中已搭建的HGS底物，一直以来在S1-sEVs和S2-sEVs上都就可以关注到EGF蛋清，但在S1-sEVs中EGFR泛素化程度要高得多，HGS在将泛素化货物运输指引到S1-sEVs中起重要的效应，经过搭建HGS敲除細胞系察觉HGS的欠缺分析S1-sEVs的海洋微生物再次遭受显著才能减少，但对S2-sEVs的带来基本上不能导致，表面S1-sEVs和S2-sEVs经过其他的调节器管理机制分泌量，分为通称ESCRT信任症性和ESCRT非信任症性路径（图8a-t）。
图8：sEVs的5个亚群两者之间怪物的发生的区别调整
二、文章内容个人总结
本研究使用TFF和SEC从人MSC中分离的两个sEV亚群在大小、膜标志物或携带物上表现出差异，并探究不同的sEVs亚群代表了MSCs的不同生物学功能。利用蛋白酶组学，miRNA测序及基因敲除，模型构建等分子生物学实验表明了高度表达CD9、HRS和GPC1的S1-sEVs表现出更大的免疫调节作用，而富含CD63和FLOT1/2表达的S2-sEVs在促进细胞增殖和血管生成方面具有增强的能力。这些差异归因于它们包含的特定蛋白质和miRNA。进一步研究显示，两个不同的sEVs亚群对应于不同的生物过程：ESCRT通路（S1-sEVs）和以脂质筏（S2-sEVs）为代表的ESCRT非依赖性通路（图9）。这种方法可能为各种MSC适应症的靶向治疗干预提供优势。
图9：sEVs亚群的生态学分解依耐于有所差异的细胞系内行业
三、拜谱总结ppt
该研究使用TFF-SEC系统从人脐带间充质干细胞中规模化生产不同的sEVs亚群，并且鉴定和表征了两种不同的sEVs亚群，S1-sEVs和S2-sEVs，它们在生物发生、特征和携带物含量方面有所不同。这些差异导致了它们生物学功能的变化。虽然MSC衍生的SEV因其临床潜力而备受关注，但该研究引入了一个新概念，即利用这些不同的MSC sEVs亚群对特定疾病进行靶向治疗。拜谱生物为该研究提供了蛋白酶组学检测分析服务，拜谱生物可提供完善成熟的转录组学、蛋白组学、代谢组学以及多组学联合产品技术服务体系，助力发表高分文献，欢迎致电咨询！
学习医学文献：
LiuW, Wang X, Chen Y, Yuan J, Zhang H, Jin X, Jiang Y, Cao J, Wang Z, Yang S, Wang B, Wu T, Li J. Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography. J Extracell Vesicles. 2025 Jan;14(1):e70029. doi: 10.1002/jev2.70029. PMID: 39783889; PMCID: PMC11714183
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