肉的宰后嫩化主要归因于肌原食物氯纶形式的受到破坏，肌原食物氯纶形式是由内源性球蛋清电离酶溶解肌原食物氯纶和组织生殖細胞核系骨架球蛋清发生的。与两百多年来直是重视视点的钙球蛋清酶有差异 ，胱天球蛋清酶（caspases）前段时间变为感想法的话语题。胱天球蛋清酶在组织生殖細胞核系凋亡的继续执行过程起着至关核心的效用，里面caspase-3在生前球蛋清电离中的效用是供需双地方和多样化的，为此有必要进三步设计。S-亚硝基化利用调理钙放、人体脂肪排泄、球蛋清质溶解和组织生殖細胞核系凋亡来调理色泽，涉及到嫩度和持水专业能力。先前设计看到S-亚硝基化可不可以再降依懒线粒体的caspase-3级联体现，这可能性是肌肉组织组织生殖細胞核系凋亡和牛肉片品质质量變化的主观原因。caspase-3的设计关键性是其与组织生殖細胞核系凋亡的的联系，显然，太少有设计讨论S-亚硝基化调理caspase-3的新机制。

2024年9月由苏州种植业大专张万刚专家教授项目团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱微生物为该研究提供了亚硝基化绘制组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文翻译版头：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

刊物：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2026年导致细胞：5.7

发布周期：2024年9月

雇主厂家：南京农业大学

深入分析用料：蛋白

拜谱打造的技术：亚硝基化修饰组学

能力线路：

一、研究分析结论

01.Caspase-3特异性

现今尚不明白NO对caspase-3的调节目的有没归因于NO介导的S-亚硝基化，不一样含量等度的GSNO当作外源性NO批售，以引导caspase-3的身体之外S-亚硝基化。但是表示，与不会有GSNO的组好于，100、200和400μM GSNO组的caspase-3吸附性酶取得有效下降（图1），与原本新闻报导相符。GSNO补救有效下降caspase-3吸附性酶的不确定其原因仍亟需揭示。

图1 多种溶度的GSNO外理对caspase-3活力的损害

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化成度

调查Caspase-3的亚硝基化度，以阐发GSNO对Caspase-3的体现性。经GSNO处置后，加测到caspase-3球蛋白S-亚硝基化刚度不断增加（图2）。等等的结果取决于，外源性GSNO塑造可成功的帮助caspase-3的离体S-亚硝基化。最令震惊的是，在并没有GSNO存有的對照组中加测到一暗淡的S-亚硝基化带，这取决于caspase-3能够再次发生内源性的S-亚硝基化。还有就是，本调查中caspase-3的S-亚硝基化度较高，而caspase-3的几丁质酶缩减，这与以往的调查统一。但，caspase-3的活性朋友S-亚硝基化淡化位点尚不模糊不清，还是需要进一个步骤的不断探索。

图2 GSNO治疗对caspase-3S-亚硝基化平均水平的影响到

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化装饰组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的队列。白色标志的队列标识S-亚硝基化肽，橘红色标志的C标识S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3吸附结蛋白酶

结淀粉酶酶当作的一种注重的内部核骨架淀粉酶酶，在维护肌内部核的组成的的组成全版性和缩水性方位起着注重功用，钻研S-亚硝基化caspase-3对结淀粉酶酶可挥发的太准确性和理性存在着注重功用。与Std（未用胱天淀粉酶酶酶-3和GSNO孵育的默认值肌化学纤维棉淀粉酶酶）组相比之下，0 μM GSNO组（肌原化学纤维棉和caspase-3的孵育，无GSNO）的全版结淀粉酶酶的分子量显著性大幅度降低，报错caspase-3对结淀粉酶酶存在着潜在的的淀粉酶酶水解反应层次。在GSNO孵育后，全版结淀粉酶酶的的分子量显著的加大（P < 0.05）。不仅，当GSNO酸度增加时，全版结淀粉酶酶的的分子量连续调整（P < 0.05）（图5）。某一发掘取决于，SNO遮盖的caspase-3以层次依赖症的措施可抑制结淀粉酶酶的可挥发。

图5.S-亚硝基化caspase-3分解结淀粉酶

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3吸附肌钙蛋白酶-T

肌钙球球淀粉酶酶-T (TnT)是原肌球球球淀粉酶酶调责任力量膨胀的细细的的一定肌原合成化学玻璃纤维球球淀粉酶酶。TnT的可可挥发塑料特殊性是验测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化力下，caspase-3对TnT的可可挥发塑料的情况提示6提示，与Std组（只含caspase-3和GSNO的肌原合成化学玻璃纤维）相比之下，caspase-3组中30 kDa TnT片断强烈上升，取决于caspase-3参与者了TnT的可可挥发塑料，显然，caspase-3与GSNO的孵育造成的30 kDa TnT会减少。在100和200 μM GSNO组范围内沒有验测到强烈的差异化(P > 0.05)，而当GSNO的氧浓度满足400 μM 时，该片断强烈会减少(P < 0.05)。等得知取决于了SNO体现语的caspase-3对TnT可可挥发塑料的抑加工用用。结球球淀粉酶酶和TnT是caspase-3的敏感脆弱底物，而GSNO整理减轻了caspase-3的活力性能够造成的肌原合成化学玻璃纤维球球淀粉酶酶可可挥发塑料地步减轻了。综合上面的所诉，NO诱骗的S-亚硝基化会顺利通过体现语半胱氨酸残基来调caspase-3的活力性，而使进这一步引响其对结球球淀粉酶酶和TnT的球球淀粉酶酶蛋白质水解力，而使引响牛羊肉的品质。

图6. S-亚硝基化caspase- 3可降解肌钙球蛋白-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本设计宗旨在讨论S-亚硝基化对caspase-3装饰的诱发十分接着随后对牛羊肉肌原钎维身体化学降解的诱发。蛋清S-亚硝基化还可以装饰caspase-3的半胱氨酸残基，为了诱发caspase-3化学活化调低，进这一步遏制了其对牛羊肉肌原钎维蛋清的蛋清蛋白质水解本事。

三、拜谱个人心得体会

论述选用了酶活校正，亚硝基化掩盖组学了解，WB等检验方法手段，察觉到血清S-亚硝基化行掩盖caspase-3的半胱氨酸残基，这导至了caspase-3灵活性的降低，齐头并进几步抑止了其对羊肉肌原纤维棉血清的血清淀粉水解程度。本论述为解说血清质亚硝基化对肉肥的调空体制打造一堆个新的视野。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的淀粉酶质组学、突显淀粉酶质组学、排泄组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸物料物料，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total氧化的恢复原、游走巯基，欢迎大家咨询！

决定性论文资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663